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标题: 韦老师检查球虫？？？ [打印本页]

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-28 16:30
标题: 韦老师检查球虫？？？
本帖最后由大海兔业于 2009-3-29 08:05 编辑

韦老师请教一点有关使用显微镜方面的知识。
      用显微镜检查兔子的球虫的步骤是怎样的呢？
      1：-------？
      2----------？
      3：--------？
      4：---------？
      另外请教韦老师，看到有的帖子里面有说显微镜的油镜问题，看细菌一定要有油镜吗？油镜是什么？我们使用的显微镜有油镜吗？

   谢谢韦老师在百忙当中抽空教我们一下。

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-29 08:06
我顶一下-------------------------！！

作者: 仔兔王 时间: 2009-3-29 17:15
:victory:\留意了再来学习老师的方法

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-29 18:40
不知道韦老师会不会回我的贴子？

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-30 08:07
不知道韦老师会不会回我的贴子？-------------？

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-30 10:50
不知道韦老师会不会回我的贴子？-------------？

作者: 韦学政 时间: 2009-3-30 19:27
球虫病（coccidiosis）是家兔的一种重要寄生虫病。本病对免危害较大，急性暴发的死亡率可超过30％以上；特别在集约化的养兔中，若控制不严，会造成重大的经济损失。　　本病的病原为孢子虫纲（SPorozoa），球虫亚纲（Coccidia），艾美耳科（Eimeriidae）中的艾美耳属（Eineria）、等抱属的球虫。国内外对兔球虫病诊断的方法是病原检查，并结合临床症状和病理剖检进行综合诊断。综合诊断主要用于发病或死亡后的诊断，确定是否因感染球虫而发病或死亡。病原检查可广泛用于流行病学调查、防治药物的筛选和临床验证、无本病健康兔群群的建立等。　
　免的球虫病（感染）的诊断。　　1.病原检查　　1.1材料准备　　1.1.1饱和盐水，配制方法见附录 A（标准的附录）。　　1.1.2 60目铜丝网或尼龙网、100mL量杯、50mL和100mL烧杯、5mL玻璃瓶、吸管、镊子、天平、离心机、麦氏虫卵计数板、载玻片、盖玻片、显微镜等。　　1.1.3被检兔或兔群的新鲜粪便不少于 200 g。　　1.2操作方法　　1.2.1定性检查　　1.2.1.1取被检兔或兔群群的新鲜粪便 10g，放人50mL烧杯中，加人适量水。　　1.2.1.2轻轻搅匀，经60目铜丝网或尼龙网过滤。　　1.2.1.3将滤液移人 4支10 mL～15 mL试管，2500r／min离心10min。　　1.2.1.4倾去上清液，各管沉淀物中加人少量饱和盐水，混匀。各管的沉淀物混悬液移入一个5mL玻璃瓶。　　1.2.1.5用饱和盐水（见附录A）加满，盖上盖玻片（盖玻片须能与液面接触），静置10min。　　1.2.1.6取下盖玻片，放在载玻片上。　　1.2.1.7置载玻片于显微镜台上，用10×10或10×40的倍数进行检查。　　1.2.1.8判定：　a）发现球虫卵囊，判为阳性，说明该兔（群）已感染球虫，并可根据附录 C（提示的附录）卵囊形态特征，初步确定为哪一属的球虫；　b）未发现球虫卵囊，需重复检查5次，仍未见球虫卵囊，本粪样可判为阴性。只有连续检查粪便7d～10d，均未发现球虫卵囊，方可说明该兔（群）未感染球虫。　　1.2.2定量检查　　1.2.2.1对定性检查中呈阳性的粪样，要进行定量检查。　　1.2.2.2取待检粪样2g，放人50mL烧杯　　1.2.2.3加人少量自来水搅匀，经 60目铜丝网或尼龙网过滤，并用自来水冲洗几次滤网。　　1.2.2.4滤液经2 500r/min离心10min。　　1.2.2.5用少量饱和盐水将沉淀物搅匀，移人100mL量杯，加饱和盐水至60mL处，充分混匀。　　1.2.2.6用吸管吸取混悬液注满麦氏虫卵计数板，静置5min。　　1.2.2.7将麦氏虫卵计数板置于显微镜下检查，用10×10或10×40倍，数出每个刻室（1cm×1cm×0.15cm=0.15cm3,含100个小方格）内的所有卵囊数，计算出平均值A。对压线的卵囊，按左、上压线计，右、下压线不计处理。　　1.2.2.8每克粪便卵囊数（OPG）按式（1）计算： OPG=（A÷0.15）×60÷2=A×200……………………………………（1）　　1.2.2.9对卵囊数较多的粪便，可在60mL的基础上，用饱和盐水再稀释B倍后计数，则OPG按式（2）计算： OPG=A×200×B…………………………………………（2）　　1.2.2.10判定标准 a)OPG>10×104,为严重感染； b) 10×104≥OPG≥1×104，为中度感染； c)OPG<1×104，为轻度感染。　　2．病理检查　　2.1材料准备　　2.1.1磷酸盐缓冲液（PBS），配制方法见附录B（标准的附录）。　　2.1.2 50mL或100mL烧杯、吸管、镊子、玻片、盖玻片、显微镜、水浴锅等。　　2.1.3疑为发生球虫病的兔（群）的粪便或球虫感染致死或要死亡的兔子。　　2.2病变检查　　2.2.1 对疑为球虫感染致死或将要死亡的动物，进行解剖，　　2.2.2 主要检查肠道病变。若肠道明显肿大、胀气或变形；肠浆膜面出现针尖大小，颜色为鲜红色、褐色或白色的斑点或斑块等，肠粘膜增厚，有坏死的病灶和灰白色的斑点或斑块等，可疑为球虫病，进一步做球虫裂殖子或卵囊的检查。　　2.2.3 对兔，要检查肝脏。若肝脏器上有灰白色的斑点或斑块，可疑为球虫病，进一步做球虫卵囊检查。　　2.3 裂殖子检查　　2.3.1 取病变明显的肠道，纵向剪开，用磷酸盐缓冲液（见附录B）轻轻洗去粘膜表层的杂物。　　2.3.2 刮取少许粘膜，放在载玻片上，滴1~2滴磷酸盐缓冲液，加盖玻片，置于显微镜下检查。　　2.3.3 在高倍镜下，如见有大量球形的像剥了皮的桔子似的裂殖体和香蕉形或月牙形的裂殖子，即可确诊为球虫病。　　2.4 卵囊检查　　2.4.1 将病变明显的肠道，纵和剪开。取少量内容物，放在载玻片上，滴1~2滴磷酸缓冲液，加盖玻片，轻轻将内容物压散，置显微镜下检查，若见大量球虫卵囊，可确诊为球虫病。　　2.4.2 取有灰白色斑点或斑块的肠道，纵向剪开，用磷酸盐缓冲液轻轻洗去粘膜表层的杂物。刮取少许有灰白色斑的粘膜，放在载玻片上，滴1~2滴磷酸盐缓冲液，加盖玻片，轻轻将内容物压散，置显微镜下检查，若见大量球虫卵囊，可确诊为球虫病。　　2.4.3 对疑为兔球虫病，从有灰白色斑点或斑块的肝脏上，剪取少量病变组织，放在研钵内，加适量磷酸盐缓冲液，充分研磨。取1滴研磨液在载玻片上，加盖玻片，置显微镜下检查，若见大量球虫卵囊，可确诊为球虫病。 (这是国家检测兔球虫的标准)

作者: 大海兔业 时间: 2009-3-31 11:52