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SPF家兔种群的建立

SPF家兔种群的建立

SPF家兔种群的建立
1959年Wostomann和pleasants首次报道经剖腹产子宫摘子术,人工哺乳培育成功无菌兔子,而后来建立不同等级的实验用兔,并广泛用于科学研究和产品质量检定等。20世纪80年代,我国也成功地培育了无菌兔,由于种种原因,未能建立起SPF级和清洁级种群。
普通环境下饲养的家兔,携带多种病原体,不仅严重影响实验结果的准确性、可*性和可重复性,而且某些病原体的存在,严重影响实验兔的生产和供应。为全面提升实验兔的微生物质量,满足国内生产、科研、检定的需要,我们采取剖腹产手术的方法对新西兰兔进行了剖腹净化,并用人工哺乳的方法成功育成36只仔兔,植入5种正常肠道菌后,转移到SPF屏障系统内繁殖扩群,至今已达到并维持在100只种兔的生产群。
1材料和方法
1.1手术隔离器
大小为160cm×60cm×60cm,以2%过氧乙本酸溶液喷雾灭菌,密闭3h后,通风吹干备用。
1.2饲育用具
所有耐酸用品置隔离器内,以2%过氧乙酸溶液喷雾灭菌与手术隔离器一起灭菌,其它用品以60Co照射灭菌(3百万Rad剂量),从传递窗经2%过氧乙酸溶液喷雾灭菌后,传入手术隔离器内备用。
1.3剖腹产种兔
经产健康怀孕30-31d的新西兰兔,为避免剖腹产人工哺乳后代的近新繁殖,选自5个不同单位繁殖的种兔16只。
1.4人工乳与饲料
市购康复必奶奶粉,以60Co照射灭菌(3百万Rad剂量),用含善存片溶液配制成含蛋白浓度为6%—8%的溶液为人工乳。SPF兔料由北京科澳协力饲料有限公司提供。
1.5剖腹产
按常规剖腹产手术,摘取子宫[23]浸入2%过氧乙酸溶液后,迅速装入传递袋,经装有1%新洁尔灭溶液的灭菌渡槽传入手术隔离器内。
1.6子宫剥离
在子宫颈或两仔兔间的狭窄处,用镊子撕开子宫,取出胎仔,擦去羊膜羊水,并用干净纱布轻轻按摩仔兔,促使呼吸,直至全身发红。成活后剪去仔兔脐带,称体重、编号,放入饲育盒内待哺。
1.7人工哺乳
用自制乳头,利用虹吸原理,以自动吮吸法[4],每天早、中、晚定时各哺乳一次,每天哺量为各仔兔体重的20%。至20曰龄时时,可辅以经乳液浸软的颗粒饲料,25曰龄转入饲养笼内饲养,视其生长发育优劣,可在30曰龄到40曰龄之间离乳。
1.8哺乳期卫生管理
1曰龄15曰龄的仔兔,每天用已灭菌的无菌纱布清洁阴部一次,促使排尿,每周清洁饲育盒1次至2次。
1.9哺乳期温度控制
1曰龄至10曰龄,环境温度控制在32℃—34℃;10曰龄至20曰龄期间为30℃至32℃;20曰龄以后控制在29℃至30℃。
1.10植入正常菌群
各菌群由卫生部食品检验所微生物室提供。第一批离乳仔兔每只口服含菌量为108活菌体/mL肠球菌和1012活菌体/mL双歧杆菌各1mL;第二天口服含菌量为108活菌体/mL肠球菌、肠杆菌、及拟杆菌各1mL。以后数批仔兔(转入SPF屏障系统内)口服新鲜SPF兔粪以建立肠道正常菌群。
1.11微生物检测
仔兔每3个月采集粪便标本检测病毒、细菌、寄生虫。成年兔每季度送1只至2只作常规检测。
2结果
2.1剖腹产仔兔成活率
前后共剖腹产母兔16只,其中4只因产期判断有误,剖腹后仔兔发育未成熟而废弃,另有3只母兔在人工哺乳过程中由于环境温度较低(24℃—28℃),大部分仔兔死亡,在计数时未计入;其余9只母兔剖腹后,获仔兔64只,成活64只,剖腹产成活率为100%
2.2人工哺乳
同窝仔兔之间或不同窝仔之间个体大小和强弱差异较大,人工浦乳时,离乳率的差别也明显。体重在40g以下的仔兔,其离乳率仅35.3%,而体重超过50g以上的仔兔离乳率可达92%。解剖死亡仔兔,发现多数死因为乳液呛入肺部造成异物性充血;少数为体质过弱,哺乳困难,耗竭而亡。离乳后仔兔平均体重达(418±92)g。能过对仔兔生长发育过程的体重称量,证明康必奶奶粉能满足仔兔生长发育的需要,可作仔兔人工乳使用。由于仔兔本身的原因,哺乳量(30d平均需要量为959mL/只,范围在(728mL—1230mL)和体重差异很大,但不会影响仔兔的成活、发育及繁殖能力。
2.3植菌结果
人工哺乳的仔兔,由于先天和后天的各种原因,个体生长发育很不整齐。个体较小,体质较弱者,因不适应植菌和饲料变更,活力下降,逐渐消瘦,耗竭死亡。植菌45只离乳兔中,有9只死亡,36只存活,成活率为80%。
2.4微生物检测结果
我们对实验兔 的新鲜粪便、活兔样品(包括所产后代的成年兔),送中国药品生物制品检定所实验动物中心实验动物标准化室按GB11492—94和GB/T14926.1—41—94进行多次检测,结果符合SPF兔的等级标准,寄生虫、细菌、病毒各项检测结果均为阴性。
3讨论
3.1临产前的正确判断
如没有准确把握住母兔临产时间进行剖腹产,所得的早产仔兔体质弱,不适应人工哺乳,死亡率高,甚至于全部死亡。因此对母兔进行产前观察、耻骨开启大小、触摸胎仔检查,以确定剖腹产时间[3];最好是准确记录母兔的交配时间,以交配后30天作为剖腹产时间,可*性较大。
3.2人工哺乳仔兔的选择
剖腹产仔兔的大小 ,强弱差异很大,出生体重在40g以下的仔兔体质过弱,人工哺乳比较困难,常常是事倍功半,应早淘汰,以便集中精力哺育成活率高的仔兔,提高仔兔成活率和作为种兔的体质。
3.3人工哺乳流速的控制
采用吮吸法哺乳仔兔除必须有耐心、娴熟悉的哺乳技巧外,控制人工哺乳的流速是关键,流速过缓,仔兔异物性肺炎或死亡。为解决这些问题,我们采用在人工乳液中加适量的酪蛋白党溶液,提高人工乳的粘稠度;同时提高或降低人工乳的水平位置,以调节人工乳的流速,延长或缩短哺乳管的长度,控制乳头孔的大小,改变乳头
3.4早期培育已进入繁殖期的SPF兔均有繁殖力
至今,已经繁殖到第三代,并已扩大到62只母种,12只公种,大小100多只的兔群。这表明采用剖腹产净化、人工哺乳法哺乳,植入正常菌群而建立的SPF兔群是成功的,是提高实验兔群微生物质量的有效方法。

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